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MET激酶抑制剂BMS-777607对舌鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及相关机制探讨[医学论文]
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  • 用途:硕士毕业论文 Master Thesis
  • 编辑:vicky
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  • 论文编号:el2021090313175024572
  • 日期:2021-09-28
  • 来源:上海论文网
临床医学论文哪里有?本研究为MET激酶抑制剂BMS-777607在舌鳞癌治疗方面提供体外细胞实验依据,但其具体信号通路及作用机制还有待进一步探讨、其治疗效果还需要体内实验证实。

前言
BMS-777607 是 MET 激酶抑制剂,主要针对几个 MET 家族成员,包括 RON、c-MET、Axl 和 Tyr 3 等。Dai 等[6]在一种小分子 MET 激酶抑制剂 BMS-777607抑制前列腺癌转移的实验中发现,在 0.5μmol/L 时 BMS-777607 完全抑制前列腺癌细胞 PC-3 和 DU-145 的生长,还以浓度依赖性抑制细胞的迁移和侵袭;从机制上讲,BMS-777607 有效地阻断了 HGF 刺激的 MET 自磷酸化和细胞外信号调节激酶 AKT 下游信号通路,通过下调 MET 信号可以破坏转移级联反应中的关键步骤,对晚期前列腺癌进行靶向治疗。
Hu 等[7]在 BMS-777607 抑制胰腺癌的实验中发现,在 227 例胰腺癌患者中,有 33%的样本 RON 过表达、41%样本 MET 过表达、15.4%样本 RON 和 MET共过表达。胰腺癌组织中存在广泛的 RON 和 MET 共过表达与总生存期较差有显着相关。BMS-777607 通过下调磷酸化 RON 和 MET 进而抑制下游信号通路,抑制胰腺癌细胞的存活和迁移,促进细胞凋亡。它还能通过下调磷酸化 RON 和 MET的表达,抑制小鼠体内胰腺癌肿瘤的生长。
临床医学论文
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二、实验方法
(一)细胞培养及处理
舌鳞癌细胞 CAL27 细胞用含 10%胎牛血清和 1%双抗(青霉素/链霉素)的DMEM 培养基,置 37℃、5%CO2 恒温孵箱内培养,待细胞处于对数生长期时,用胰蛋白酶消化和传代培养进行后续实验。
1、细胞处理
取对数生长期舌鳞癌细胞 CAL27 细胞按照每孔 5×103个细胞接种于 96 孔板中,并设置 5 个复孔,96 孔板边缘以无菌 PBS 进行填充,置于 37℃、5%CO2的孵箱中培养。
2、实验分组
待细胞贴壁后,将 BMS-777607 按照终浓度 0、1、2.5、5、10 μmol/L 分别作用于舌鳞癌细胞,另设溶剂对照组加等体积的 0.1%DMSO。
3、实验过程
37℃、5%CO2 条件下培养 48h 后,弃培养液,每孔中加入 20 μL MTT 染色液,孵育 4h 后吸出液体,向每孔内加入 150 μL DMSO,并置于摇床上以低速震荡 10min,待蓝色结晶体溶解后用酶标仪测定 490nm 处的吸光度值(A),计算各浓度细胞增殖率。细胞增殖率=(实验组 A 值-空白对照组 A 值)/(对照组 A 值-空白对照组 A 值)×100%,实验重复 3 次。
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结果

一、MTT 法检测 BMS-777607 对 CAL27 细胞增殖率的影响
MTT 法检测结果见表 3,与对照组相比,实验组细胞增殖率随着药物浓度增大,细胞增殖率降低(图 1),差异具有统计学意义(n=3,F=94.254,P<0.01)。不同浓度的 DMSO 对舌鳞癌细胞 CAL27 细胞增殖无显著抑制作用(P>0.05)。半数抑制浓度 IC50 为 4.7 μmol/L。
表 3 MTT 法检测 CAL27 细胞在不同浓度 BMS-777607 条件下的细胞增殖率
表 3 MTT 法检测 CAL27 细胞在不同浓度 BMS-777607 条件下的细胞增殖率
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二、克隆形成实验检测 BMS-777607 对 CAL27 细胞活性的影响
克隆形成实验结果见图 2,与对照组相比,5 μmol/L 组克隆数明显减少,10 μmol/L 组未见明显克隆团,几乎处于静止期。
与对照组相比,实验组随药物浓度增大,细胞克隆形成率降低(表 4,图 3),差异具有统计学意义(n=3,F=2824.571,P<0.01),提示 BMS-777607 有显著抑制 CAL27 细胞克隆形成的能力。
图 2 CAL27 细胞在不同浓度 BMS-777607 条件下克隆形成实验的结果
图 2 CAL27 细胞在不同浓度 BMS-777607 条件下克隆形成实验的结果

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结论


细胞迁移是正常生长和身体发育的生理过程,涉及胚胎发育,血管生成,炎症,癌症转移等过程[23]。本实验通过划痕实验和 Transwell 迁移实验证明,一定浓度的 BMS-777607 可显著抑制 CAL27 细胞的迁移,迁移率与药物浓度呈负相关。上皮-间质转化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT) 是指在某些生理或病理状态下出现的上皮细胞向间质细胞表型转变的过程。近年来发现,EMT 可通过 TGF-β/Smad 通路、Wnt/β-catenin 通路、PI3K/AKT 通路等诱导细胞内信号级联失调,引起上皮细胞发生间质转化,并增强肿瘤细胞的侵袭转移能力,与肿瘤发生和癌症密切相关[24-26]。在研究表达 RON 的培养细胞皿中发现,RON 能独立或与其他合作因子(如转化生长因子 TGF-β)合作诱导 EMT[27]。Kim 等[28]通过口腔鳞状细胞癌(OSCC)研究中也发现,RON 基因敲除抑制了 OSCC 的侵袭和迁移,促进细胞凋亡,还抑制了 EMT 相关转录因子 Snail 家族中的锌指蛋白(SLUG)表达,其实验结果表明 RON 通过调节 EMT 相关因子 SLUG 和 PI3K /AKT 信号通路促进了肿瘤的进展。本实验中 Western blot 结果表明 CAL27 细胞经BMS-777607 处理后,p-AKT 蛋白表达水平下调,说明 BMS-777607 可能通过调节 PI3K /AKT 通路抑制 CAL27 细胞的迁移能力。
1、BMS-777607 对 CAL27 细胞的生长有明显抑制作用,与药物浓度呈正相关。
2、BMS-777607 可调控 Bax 与 Bcl-2 比例,增加 Parp 和 Cleaved caspase-3的表达,从而通过线粒体凋亡途径诱导 CAL27 细胞凋亡。
3、BMS-777607 通过 PI3K /AKT 信号通路抑制 CAL27 细胞增殖和迁移。
参考文献(略)